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大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物【Rat Vascular : Normal Saphenous Vein Endothelial Cell Derivatives】
     大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物圖片大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物是從大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取的，大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞從正常大鼠大隱靜脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。        cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA*鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及0mg總RNA。68℃反應(yīng)0min 后終止RT反應(yīng)。利用x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA， μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。        潛在的應(yīng)用： <>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。
培養(yǎng)步驟：
大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物圖片對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按：2到：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按：2到：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

Cy3標(biāo)記的小鼠抗山羊IgG 英文名：Cy3-conjugate Mouse anti-goat IgG 冷凍（-20℃） 避光

Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgG 英文名：Cy3-conjugate Mouse anti-rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

Cy3標(biāo)記的兔抗豬IgG 英文名：Cy3-conjugate Rabbit anti-pig IgG 冷凍（-20℃） 避光

Cy3標(biāo)記的鏈霉親和素 英文名：Cy3-conjugate Streptaviin 冷凍（-20℃） 避光  

Cy5標(biāo)記的山羊抗兔IgG 英文名：Cy5-conjugate Goat anti-Rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

Cy5標(biāo)記的山羊抗人IgG 英文名：Cy5-conjugate Goat anti-human IgG 冷凍（-20℃） 避光

Cy5.5標(biāo)記的山羊抗人IgG 英文名：Cy5.5-conjugate Goat anti-human IgG 冷凍（-20℃） 避光

山羊抗大鼠IgG 英文名：Goat Anti-Rat IgG 冷凍（-20℃） 避光

兔抗大鼠IgM 英文名：Rabbit Anti-Rat IgM 冷凍（-20℃） 避光

AP標(biāo)記的山羊抗兔IgG 英文名：AP-conjugate Goat Anti-Rabbit IgG 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的 英文名：HRP conjugate Biotin 冷凍（-20℃） 避光

HRP標(biāo)記的重組蛋白G 英文名：HRP conjugate recombinant protein G 冷凍（-20℃）

大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物圖片5-Fluorocytosine 5- 5g  瓶

Ionomycin calcium salt 鈣離子霉素 0mg  瓶

大龍移液器 5-50ul  支

dNTPs Mix(2.5mM each) ml  支

Carmine 洋紅 g  瓶

2-Cyanoacetamide 氰乙酰胺 25g  瓶

圓蓋玻片 直徑8mm 00片  盒

透析袋 扁寬3 截留分子量00000 0.5m/即用型  管

羊抗-RBITC 0.5ml  支

Tylosin 泰樂菌素 g  瓶

X/gal(20mg/ml) 5ml  瓶

注意事項：
. 接收到大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物圖片，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞00X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。